균사체 곰팡이Aspergillus nidulans에서 유성분화에 관여하는 유전자의 결실 돌연변이 제조

Abstract

Aspergillus nidulans는 자낭균류에 속하는 사상성 균류 (filamentous fungi)로 진핵 생물이면서도 중식이 비교적 빠르고 간단한 합성배지에서도 잘자라는 둥의 미생물이 갖는 여러 가지 장점을 가지고 있다. 또한 무성생식과유성생식의 분화과정을 거치는 제계적인 생활사를 갖기 때문에 유전학적, 생화학적, 생리학적 분석이 용이하다. 계통 발생학적 위치로 볼 때 원핵 생물의원시적 조절 기작과 함께 고등한 진핵 생물의 정교한 조절제계도 가지고 있어원핵 생물에서는 볼 수 없는 분화와 발생단계 연구를 수행하기에 적합하다. 본 연구에서는 Aspergillus nidulans의 유성분화에 관여하는 유전자들의조절 network를 규명하고자 유성분화 초기의 균사제로부터 expressedsequence tag (EST)을 얻었다. 이렇게 얻어진 EST로부터 분화 조절에 관여딸 가능성이 있는 EST들을 대상으로 완전한 크기의 15개의 유전자를 분리하고 DJ-PCR에 의해 이들 유전자 각각의 deletion constructs를 제조하였다. 이렇게 제조된 deletion constructs를 Aspergillus nidulans의 argB gene을가지고 있지 않은 HSY2 균주에 현질전환하고, 이렇게 얻은 형질전환제들을PCR 확인을 통하여 9개의 결실 돌연변이를 선별하였다. 다시 한번 정확한 확인을 하기 위해 probe로 argB gene을 사용하여 Southern blotting을 수행한결과, 3개의 결실 돌연변이를 최종적으로 확인하였다.|A filamentous fungus, Aspergillus nidulans, which is belong to ascomycete, is a eukaryotic microbe that grows quickly even in thesimple synthetic medium. Also Aspergillus nidulans is a model fungusto study sexual and asexual reproduction because this organismdevelops both sexual and asexual spores through complicatedmorphogenic processes, and because genetical, biochemircal, andphysiological analysis of this organism are easy and well established. In order to clarify a regulatory network of genes involved insexual development of Aspergillus nidulans, hundreds of ESTs(expressed sequence tags) have been obtained from mycelia at theearIY sexual developmental stage. Among them, IS full-length genesencoding hypothetical proteins were chosen from genomic sequencedata of A, nidulans. To make deletion mutants of these genes, deletioncassettes were constructed systematically by DJ -PCR (Double-JointPCR) and transformed into HSY2 strain. Deletion mutant candidates for 9 genes were solected by PCR, and three deletion mutants among nine candidates were finally confirmed by Southern blotting.