Aspergillus nidulans에서 유성분화 초기에서 얻은 EST 유전자의 결실돌연변이 제조

Abstract

사상성 진균류인 Aspergillus nidulans의 유성분화에 관여하는 유전자들의 조절 network을 규명하고자, 유성분화 초기의 균사체로부터 expressed sequence tag(EST)을 얻은 바 있다. 이렇게 얻은 EST들을 Aspergillus nidulans의 genomic DNA sequence와 비교하여 EST를 포함하는 유전자들을 알아내었으며, 이들 중에서 특정 motif를 갖고 있거나 기능이 전혀 알려지지 않아 분화에 관여할 가능성이 있는 14개의 유전자를 선별하였다. 본 연구에서는 이 유전자들이 분화에 어떤 영향을 미치는지를 알아보고자 각각의 결실돌연변이주 제작하였다. 먼저, 선별마커로 argB 유전자를 넣은 deletion constructs를 DJ-PCR (Double Joint - Polymerase Chain Reaction)을 이용하여 제조하여 야생형 균주에 형질전환시켰다. 이렇게 얻은 형질전환체들로부터 genomic DNA를 추출하여 PCR과 Southern blotting을 실시하여 각각의 결실돌연변이를 확인하였다. 그 결과 14개의 유전자 중 8개의 결실돌연변이를 각각 확인 · 분리하였다.|For identification of a regulatory network of genes involved in sexual development of filamentous fungi Aspergillus nidulans, hundreds of ESTs (expressed sequence tags) have been obtained from mycelia at the early sexual developmental stage. In this study, 14 ESTs were chosen to make deletion mutations for further analysis because these encode mostly hypothetical proteins annotated in A. nidulans genome project and is thought to be possibly involved in sexual development. First, deletion cassettes containing a argB gene as a selection marker were constructed systematically by DJ(Double Joint)-PCR(Polymerase Chain Reaction) and transformed into wild-type strain. Genomic DNA were isolated from the transformants and deletion mutants were confirmed by PCR and Southern blotting. At the end, each deletion mutants for eight genes among 14 were isolated.